鸡MHC Iα-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

• 作者: 刘光亮 吴东来 孟庆文 王群 童铁钢 肖一红
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡MHC克隆 生物素化序列 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 662-668
• 页数: 7页
• 分类号: S188
• 字数: 6491字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.05.005

摘要

实验克隆了莱航鸡(Gallusgallus)MHC Iα(BF2)(GenBank登陆号:AY989897)全基因,分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-BF2-BSP,在大肠杆菌(Escherichia coli)中得到表达,并优化了诱导剂浓度、起始诱导菌体浓度及诱导时间等表达条件.SDS-PAGE分析结果表明所得融合目的蛋白约为40 kD,Western-blot结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签;pET-BF2-BSP最优化表达条件分别为:菌体起始诱导浓度OD600nm0.8～1.2,IPTG诱导浓度1.1 mmol/L,诱导时间2～4 h;建立了该重组蛋白变性状态下通过镍柱亲和层析纯化包涵体的方法.实验获得了高纯度的在体外构建鸡MHC-肽四聚体所需的重组蛋白BF2-BSP.