先天性长QT综合征相关HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建及表达

• 作者: 崔长琮 廉姜芳 李宇 薛小临 赵小鸽 赵永辉 黄辰
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 先天性长QT综合征 HERG基因 突变 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 627-630
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3572字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2006.06.007

摘要

目的 在收集的一个先天性长QT综合征(congenital long QT syndrome, LQTS)家系中发现HERG基因A561V突变,探讨HERG基因A561V突变体及其真核表达载体的构建方法,并观察其在真核细胞中的表达.方法 采用克隆载体快速PCR法构建HERG基因A561V突变体PGEM-HERG-A561V,并应用限制性内切酶法将突变体构建到真核表达载体pcDNA3中,用Superfect转染试剂将野生型pcDNA3-HERG及pcDNA3-HERG-A561V突变体与荧光真核表达载体pRK5-GFP共转染至 HEK293细胞,用细胞免疫荧光化学法检测蛋白质表达.结果 构建的突变体经DNA直接测序示HERG基因cDNA1682位点碱基C变为T,构建的突变体在HEK293细胞中成功表达,其蛋白质位于细胞浆中及细胞膜上,而野生型基因的蛋白质位于细胞膜上.结论 用克隆载体快速PCR法构建并表达了HERG基因A561V突变, 为突变基因的进一步功能研究奠定了基础.