丙酮酸甲酸裂解酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及酶学性质的研究

• 作者: 周兴 杨登峰 韦宇拓 黄志民 黄日波
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 丙酮酸甲酸裂解酶 克隆 表达 酶学性质
• 年，卷（期）: 2006,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 28-31
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3452字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2006.08.006

摘要

丙酮酸甲酸裂解酶(pyruvate formate-lyase,PFL)是厌氧或兼性厌氧微生物中,代谢途径的关键酶之一,为了进一步研究其功能,我们以大肠杆菌JM109菌株基因组DNA为模板,进行PCR扩增大肠杆菌中的pfl基因.为测序方便将所得DNA片段连接到pMD18-T载体上,将测序正确后的pfl基因连接到表达载体pET-22b(+)中,重组表达载体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,通过SDS-PAGE电泳分析,在分子量为85kDa处出现新生的蛋白条带.利用金属亲和层析对添加了6×组氨酸标签的PFL进行纯化,对PFL的酶学性质进行了研究.结果表明:此酶的最适温度为35℃,最适pH为7.5,米氏常数Km=2.3mmol,Tm=49.9℃.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韦宇拓	广西大学生命科学与技术学院广西亚热带生物资源保护利用重点实验室	83	584	14.0	20.0
2	黄日波		84	623	14.0	19.0
4	杨登峰		24	219	9.0	14.0
7	黄志民		24	229	8.0	14.0
8	周兴		18	145	6.0	11.0