葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 徐章逸 洪霓 王国平
• 来源期刊: 果树学报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄卷叶伴随病毒-3 复制酶 反转录-聚合酶联反应 原核表达
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 252-255
• 页数: 4页
• 分类号: S663.1
• 字数: 2812字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9980.2006.02.022

摘要

以感染有葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)的葡萄韧皮部组织中提取到的dsRNA为模板,利用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,对GLRaV-3的复制酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)基因进行克隆,获得了预期大小的目标片段.将此片段克隆到载体pBluescript SKⅡ,酶切鉴定后测序.测序结果表明:RdRp cDNA全长为1618 bp.经BLAST分析推导其可能编码538个氨基酸,与报道的GLRaV-3美国分离物NY1 RdRp核苷酸相似性为99.3%,氨基酸相似性为99.6%;推导的氨基酸序列与其同属的PMWaV-2、GLRaV-1和LChV-2的RdRp氨基酸序列相似性分别为53%,50%和38%,包含了GDD在内的8个保守基元序列.将该段RdRp连接到表达载体pET22b(+)上,获得的重组子pET-RdRp转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后,用1 mmol/L的IPTG进行诱导.SDS-PAGE分析表明,RdRp在大肠杆菌中被诱导表达,融合蛋白分子量约为61 kDa.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王国平	华中农业大学植物科学技术学院	61	723	16.0	25.0
3	洪霓	华中农业大学植物科学技术学院	53	460	12.0	19.0
5	徐章逸	华中农业大学植物科学技术学院	10	38	3.0	6.0