高频等位基因HLA-A*1101重链胞外域-BSP融合蛋白原核表达载体的构建及表达鉴定

• 作者: 何贤辉 徐丽慧 李丰耀 查庆兵 贾仟涛 迟晓云
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫学 高频等位基因HLA-A*1101 生物素化酶底物肽 融合蛋白 原核表达 包涵体
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 509-514
• 页数: 6页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3756字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2006.04.002

摘要

目的:构建HLA-A*1101重链胞外域羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的融合蛋白(HLA-A11-BSP)原核表达载体,并在大肠杆菌中表达该融合蛋白.方法:以RT-PCR法扩增并克隆HLA-A*1101重链基因的cDNA,以PCR方法构建HLA-A11-BSP的表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法进行鉴定.结果:从HLA-A2阴性的供者外周血单个核细胞中克隆到HLA-A*1101重链基因的cDNA,以此cDNA为模板,将编码HLA-A*1101重链胞外域1～276序列与编码BSP的序列融合,构建HLA-A11-BSP融合蛋白表达载体,重组质粒经测序验证.融合蛋白在BL21(DE3)中诱导后获得高效表达,约占菌体总蛋白的20%;其相对分子质量约为35 000,与理论值一致.免疫印迹分析显示表达产物主要存在于包涵体中,上清液中几乎无任何产物存在.结论:成功构建表达HLA-A11-BSP融合蛋白的原核表达载体,该融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式获得高水平表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐丽慧	暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所	69	509	13.0	20.0
2	何贤辉		98	770	16.0	23.0
3	迟晓云		8	15	3.0	3.0
4	李丰耀		7	9	2.0	2.0
5	贾仟涛		6	9	2.0	2.0
6	查庆兵		28	71	4.0	7.0