狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中稳定表达条件的优化及纯化

• 作者: 于志凤 刘晔 张守峰 张菲 扈荣良
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒核蛋白 大肠杆菌 诱导温度 菌密度 IPTG浓度 诱导时间
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医
• 页码范围: 581-585
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65|Q786
• 字数: 4214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-5684.2006.05.028

摘要

将狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因按正确的读码框克隆至GST融合表达载体pGEX-4T-1中,转化至大肠杆菌Rosetta株,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白经SDS-PAGE分析显示,相对分子量约为82 kD,与预期大小一致.Westem-blot检测结果表明,融合蛋白能与多克隆阳性血清发生特异性反应.为获取大量ELISA包被用核蛋白,试验还借助SDS-PAGE方法对重组目的基因的表达条件进行了优化,比较了诱导温度、菌密度、IPTG浓度、诱导时间等参数对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件.结果表明:27～32℃,OD550 0.3～0.4,IPTG 0.06 mmol/L、诱导至OD550值不再增加时为最佳诱导表达条件.优化后经扫描分析显示,所表达融合蛋白占菌体总蛋白的20%以上.经包涵体纯化和亲和层析纯化,可获得纯度较高的GST融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张守峰	军事医学科学院军事兽医研究所	65	311	9.0	13.0
2	刘晔	军事医学科学院军事兽医研究所	35	198	7.0	12.0
4	扈荣良	军事医学科学院军事兽医研究所	92	445	11.0	15.0
5	张菲	军事医学科学院军事兽医研究所	15	125	5.0	11.0
8	于志凤	军事医学科学院军事兽医研究所	1	6	1.0	1.0