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摘要:
目的:构建并鉴定心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体(MHC-EGFP),该基因只在心肌中特异性表达.方法:设计5'和3'分别具有SalI/HindⅢ酶切位点的EGFP引物,聚合酶链反应法(PCR)从pLEGFP质粒中扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的cDNA,插入pGEM-T Easy载体表达盒,构建pGEM-EGFP,SalI/HindⅢ双酶切后回收729 kb片断,插入经相同酶切的含5.5 kb心肌特异性α肌球蛋白重链启动子的pNC26质粒,构建pMHC-EGFP.连接产物转化感受态DH5α,挑选克隆,PCR扩增鉴定,重组质粒经NotI酶切,回收7.2 kb MHC-EGFP表达盒.分离培养小鼠心肌细胞与骨骼肌成肌细胞.MHC-EGFP表达盒通过脂质体法分别转染心肌与骨骼肌成肌细胞.荧光显微镜观察转染细胞是否出现绿色荧光,以鉴定MHC-EGFP表达盒是否具有表达特异性.结果:EGFP cDNA正确插入pNC26质粒中αMHC启动子3'端.成功转染MHC-EGFP表达盒的心肌细胞出现绿色荧光,而转染的骨骼肌成肌细胞无荧光出现.结论:MHC-EGFP表达盒具有心肌特异性表达特性,为进一步监测干细胞向心肌分化研究奠定基础.
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文献信息
篇名 心肌α肌球蛋白重链启动子驱动的绿色荧光蛋白表达载体的构建及鉴定
来源期刊 郧阳医学院学报 学科 生物学
关键词 心肌特异性 肌球蛋白重链 启动子 增强型绿色荧光蛋白 干细胞
年,卷(期) 2006,(2) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 70-73,封三
页数 5页 分类号 Q786
字数 2833字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1006-9674.2006.02.002
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启动子
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研究起点
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引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
湖北医药学院学报
双月刊
1006-9674
42-1815/R
大16开
湖北省十堰市人民南路30号
1982
chi
出版文献量(篇)
4066
总下载数(次)
4
总被引数(次)
9322
相关基金
湖北省自然科学基金
英文译名:Natural Science Foundation of Hubei Province
官方网址:http://www.shiyanhospital.com/my/art/viewarticle.asp?id=79
项目类型:重点项目
学科类型:
论文1v1指导