死亡受体5胞外区域的重组、表达及活性鉴定

• 作者: 宋玉国 庄国洪 张长弓 李文珠 王莉 陈彩霞
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 死亡受体5 基因克隆 表达 胶质瘤细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 462-465,468
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3285字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2006.06.012

摘要

目的: 构建死亡受体5(death receptor 5,DR5)胞外区域(eDR5)的表达载体,表达纯化重组蛋白并鉴定其生物特性.方法: 通过重叠 PCR 获得 DR5 胞外段编码序列,构建 pET-22b(+)/DR5 表达载体,转化大肠杆菌 BL21(DE3),IPTG 诱导表达,Ni2+柱亲和纯化,SDS-PAGE、直接 ELISA 鉴定纯化产物的纯度和特异性,用 MTT 法检测eDR5 蛋白阻断DR5 单克隆抗体 FMU1.5 和 TRAIL 诱导人胶质瘤细胞株 U343(高表达DR5)、U373(低表达DR5 )细胞凋亡的作用.结果: 获得了 DR5 胞外段编码序列,目的蛋白在上清及包涵体中都有表达, 表达量占菌体总蛋白的 30% 以上,纯化的重组蛋白纯度达 95% 以上,蛋白产量达 9 mg/ml.ELISA 结果表明所纯化蛋白为eDR5.eDR5 蛋白可部分阻断 FMU1.5 和 TRAIL 诱导人胶质瘤细胞株 U343 细胞凋亡的作用,其阻断率与 DR5 表达相关.结论: 死亡受体 5 胞外段基因的成功重组、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张长弓	厦门大学医学院	22	274	9.0	16.0
2	陈彩霞	厦门大学生命科学学院	8	12	2.0	3.0
3	庄国洪	厦门大学医学院	27	61	4.0	5.0
4	李文珠	厦门大学生命科学学院	14	23	3.0	4.0
5	王莉	厦门大学生命科学学院	8	1	1.0	1.0
6	宋玉国	北华大学医学院	29	108	6.0	8.0