小鼠趋化因子CCL19Ig融合蛋白表达载体的构建、表达及鉴定

• 作者: 奉友刚 曾甫清 李爱玲 李翀 王光明 袁国红 谢蜀生 郝杰 高翔
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 趋化因子 CCL19 重组融合蛋白 基因表达 趋化活性
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 331-335
• 页数: 5页
• 分类号: R392.4
• 字数: 3640字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2006.04.016

摘要

通过特异引物扩增出去掉终止密码的mCCL19编码序列,经酶切、亚克隆、拼接构建了真核表达载体pcDNA3.1-mCCL19Ig,酶切和测序鉴定插入序列;将重组质粒转染CHO细胞进行体外表达,通过RT-PCR、Western blot 鉴定目的基因的表达,利用趋化小室法测趋化活性.结果测序证实重组表达载体含mCCL19编码序列和人IgG1 Fc段序列,其序列分别与GenBank中公布序列比对一致,IgG1 Fc段读码框未发生改变;Western blot结果证实转染了pcDNA3.1-mCCL19Ig的CHO细胞培养上清中有相对分子质量为38000的融合蛋白mCCL19Ig表达;体外趋化实验表明融合蛋白mCCL19Ig对小鼠脾细胞有趋化活性,且呈剂量依耐关系.