人脂联素基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

• 作者: 兰丽珍 刘金波 李丙蓉 邓华聪 郑宏庭
• 来源期刊: 中华内分泌代谢杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂联素 克隆,分子 基因表达 真核细胞
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 464-466
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2748字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6699.2006.05.019

摘要

目的 构建人脂联素(APM1)基因真核表达载体,并检测其在HEK293细胞中的表达水平.方法 用PCR法从测序正确的pGEM-T-APM1质粒上,扩增出两端带有SfiⅠ酶切位点的人脂联素基因,再将扩增出的片段亚克隆到T载体上,用SfiⅠ酶切T载体和pCDEF空载体,将酶切后的片段进行连接、转化、筛选、鉴定、测序.将成功构建的pCDEF-APM1质粒转染HEK293细胞,ELISA检测培养上清中脂联素的水平.结果 构建的pCDEF-APM1质粒能有效转染HEK293细胞,并在培养上清中检测到较高水平的脂联素蛋白.结论 成功地构建了人脂联素基因的真核表达载体,并在HEK293细胞中获得高效表达.