大肠杆菌分泌表达重组人肝再生增强因子的纯化、鉴定与活性研究

• 作者: 任乐民 周兴军 宋欣 暴娜 董爱华 贾茜 赵广荣 郝爱鱼 高文利
• 来源期刊: 中国生化药物杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝再生增强因子 纯化工艺 鉴定 黄素腺嘌呤二核苷酸 生物活性
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 8-11,14
• 页数: 5页
• 分类号: R657.3|R378.21
• 字数: 3363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-1678.2006.01.003

摘要

目的建立一种大肠杆菌分泌表达型重组人肝再生增强因子(rhALR)的纯化工艺,并对产品进行鉴定和活性研究.方法通过沉淀、色谱等方法的条件优化,建立纯化工艺,通过电泳、HPLC、N-末端氨基酸测序、免疫杂交、同位素掺入、全波长扫描等方法对纯化产品进行鉴定和活性测定.结果建立了rhALR的纯化工艺路线,40%(NH4)2SO4沉淀,Butyl-S FF疏水色谱,CM-S FF离子交换色谱,Superdex-75分子筛色谱纯化,重组蛋白质的纯度大于95% .该蛋白质稳定存在的形式为二聚体,其单体的相对分子质量为15 000.该蛋白质结合辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD),对损伤后的肝细胞具有明显的促进作用,明显优于以包涵体形式表达的rhALR.结论从大肠杆菌分泌表达体系能分离纯化得到高纯度、具有生物学功能和活性的rhALR,是潜在的临床治疗肝病药物.