GST/MKRN1融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 林坚 白云秀 解跃华 金蕊 陈皓 黄君健
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: MKRN1 端粒酶催化亚基 融合表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 31-33
• 页数: 3页
• 分类号: Q786|R392.11
• 字数: 3245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2006.01.010

摘要

目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达GST/MKRN1融合蛋白,亲和层析分离纯化目的蛋白,进行动物免疫制备多克隆抗体.方法:MKRN1 cDNA全长1 449 bp,编码482个氨基酸残基.将其基因片段克隆到pGEX-4T-1载体上,获得pGEX-4T-1-MKRN1原核表达重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达,经谷胱甘肽Sepharose 4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到pGEX-4T-1-MKRN1多克隆抗体.结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1:256 000.通过Western免疫印迹及免疫细胞荧光分析,自制的多克隆抗体能特异地与MKRN1蛋白相互作用,可用于免疫细胞化学分析.结论:制备了效价和特异性良好的抗MKRN1多克隆抗体,经实验验证获得的免疫血清能够满足针对MKRN1的Western免疫印迹和细胞免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究MKRN1表达的组织分布、细胞内定位及与端粒酶催化亚基(hTERT)之间相互作用的生物学意义提供了有用的实验工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林坚	军事医学科学院生物工程研究所	8	104	3.0	8.0
2	陈皓	军事医学科学院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0
3	白云秀	军事医学科学院生物工程研究所	9	35	3.0	5.0
4	金蕊	军事医学科学院生物工程研究所	8	7	2.0	2.0
5	黄君健	军事医学科学院生物工程研究所	31	171	4.0	12.0
6	解跃华	军事医学科学院生物工程研究所	2	14	1.0	2.0