人DC-SIGN真核表达载体的构建及在K-562细胞中的表达

• 作者: 冯志华 张亚飞 李光玉 李军 牟丹蕾 聂青和
• 来源期刊: 肝脏
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒 丙型 树突状细胞 DC-SIGN 真核表达
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-27
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1704.2006.01.008

摘要

目的构建含人DC-SIGN基因的真核表达载体,探讨DC-SIGN在K-562细胞中的表达,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与DC-SIGN的相互作用奠定基础.方法分离人外周血单个核细胞,体外诱导分化为树突状细胞(DC);提取细胞总RNA并反转录为cDNA,设计上下游引物,利用PCR技术扩增DC-SIGN片段,连接入克隆载体pGEM-T easy;应用双酶切回收基因片段,定向克隆入真核表达载体pCDNA3.1;通过脂质体介导的基因转染技术将pCDNA3.1-DC-SIGN和空载体转入K-562细胞,应用G-418筛选稳定表达DC-SIGN的K-562细胞,以DC-SIGN单抗通过免疫荧光法检测K-562细胞的表达产物.结果 PBMC体外成功刺激分化为DC,含DC-SIGN基因的克隆载体pGEM-DC-SIGN经酶切、PCR及测序鉴定分析正确,pCDNA3.1-DC-SIGN经酶切、PCR鉴定分析正确,DC-SIGN可在K-562细胞表面稳定表达.结论 DC-SIGN可在K-562细胞中大量表达,为进一步研究DC-SIGN在HCV感染中的作用奠定了基础.