DC-SIGN真核表达载体的构建及其稳定转染BHK21细胞系的建立

• 作者: 于继云 张亮 王宇 王越 阎瑾琦
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因,DC-SIGN BHK21细胞系 树突细胞
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 304-306
• 分类号: R349.8
• 语种: 中文

摘要

目的 构建DC-SIGN分子真核表达载体,获得可稳定表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系.方法 以pUNO-hDC-SIGN1Aa质粒为模板,通过PCR方法扩增人DC-SIGN基因,经过Not Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切之后,将其克隆入真核表达载体pIRES-neo,构建真核表达载体pIRES-neo-DC-SIGN,以Not Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切以及测序验证重组质粒的正确性.将重组质粒以Lipo-fectamine~(KM) 2000转染到BHK21细胞,通过G418及有限稀释法进行阳性克隆的筛选,建立稳定表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系,利用流式细胞仪、Western blotting及免疫荧光法检测DC-SIGN分子的表达.结果 双酶切鉴定证明DC-SIGN基因已经成功克隆入真核表达载体pIRES-neo中,测序结果表明EC-SIGN基因与原序列一致.pIRES-neo-DC-SIGN转染BHK21细胞后,获得了急定表达DC-SIGN分子的细胞系.流式细胞仪检测结果显示,阳性克隆中DC-SIGN分子的表达率为85.42%.免疫荧光结果显示,DC-SIGN分子主要表达于细胞膜表面.Western blotting能检测到DC-SIGN蛋白表达的特异条带.结论 成功构建了稳定、高效表达DC-SIGN分子的BHK21细胞系,为后续DC靶向性疫苗研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阎瑾琦	军事医学科学院基础医学研究所	25	54	4.0	5.0
2	于继云	军事医学科学院基础医学研究所	59	145	6.0	9.0
3	王越	军事医学科学院基础医学研究所	14	49	3.0	6.0
4	张亮	军事医学科学院基础医学研究所	21	50	4.0	5.0
5	王宇	军事医学科学院基础医学研究所	8	11	2.0	2.0