中国野生葡萄芪合成酶基因融合表达、纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 孙马 徐伟荣 王西平 王跃进 郝炜
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 中国野生葡萄 芪合成酶 原核表达 包涵体复性 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2006,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 79-83
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 4262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2006.01.016

摘要

根据中国野生葡萄芪合成酶基因cDNA序列(该序列已申请国家发明专利,申请号:200510041662.4),设计1对PCR引物,以野生种华东葡萄(Vitis pseudoreticulata)白河-35-1 5'RACEcDNA第一链为模板,克隆该目的基因.将该基因克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,转化Escherichia coliBL21,经诱导后表达出约66 kD的融合蛋白.该融合蛋白主要以包涵体形式表达,经变性剂溶解、梯度透析,对该包涵体进行复性,复性蛋白通过与Glutathione Sepharose 4B Fast Flow结合、洗脱,获得了纯化的芪合成酶融合蛋白.以洗涤纯化的包涵体作抗原免疫家兔,制备多克隆抗血清,经Western blot检测,该抗血清(稀释到1:3000)与芪合成酶融合蛋白识别反应良好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王跃进	西北农林科技大学园艺学院	99	1997	29.0	40.0
2	徐伟荣	西北农林科技大学园艺学院	6	42	4.0	6.0