XTP3基因融合蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备

• 作者: 兰孟东 刘秀财 孙成福 徐浩 成军 李国力 洪源 王琦 赵龙凤
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎 乙型 慢性 原核表达 基因 XTP3
• 年，卷（期）: 2008,（7）
• 所属期刊栏目: 慢性病毒性肝炎发病机制的研究
• 页码范围: 796-797,800
• 页数: 3页
• 分类号: R512.62
• 字数: 2053字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2008.07.005

摘要

目的 构建稳定表达乙肝病毒XTP3蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导融合蛋白的表达,制备兔抗XTP3蛋白多克隆抗体并检测该抗体在乙肝肝癌、正常肝组织中的作用效果.方法 PCR获得XTP3基因片段,插入至pET-32a(+)中构建原核表达载体pET-32a(+)-XTP3,测序正确后转化大肠埃希菌BL21,IPTG诱导表达.SDS-PAGE、Western blotting分析鉴定融合蛋白的表达.利用Ni亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性.免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blotting及免疫组化验证.结果 成功构建pET-32a(+)-XTP3表达载体并在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的XTP3融合蛋白,目的蛋白分子量为52kD,SDS-PAGE分析表明为包涵体表达.经亲和树脂纯化后免疫新西兰兔,成功获得融合蛋白及兔抗XTP3多克隆抗体.ELISA检测证明多克隆抗体效价>1:128 000.免疫组化证实本实验中XTP3多克隆抗体在肝癌组织中的表达呈明显的细胞膜阳性,特异性良好.结论成功表达、纯化了XTP3基因融合蛋白,获得高特异性、高效价兔抗XTP3多克隆抗体,为进一步研究XTP3蛋白的生物学特性奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	成军	北京地坛医院传染病研究所	210	843	13.0	20.0
2	兰孟东	北京地坛医院传染病研究所理科	30	105	7.0	9.0
3	洪源	北京地坛医院传染病研究所	44	70	5.0	6.0
4	赵龙凤	山西医科大学附属第一医院感染病科	150	670	12.0	18.0
5	王琦	北京地坛医院传染病研究所	29	36	3.0	4.0
6	李国力	北京地坛医院传染病研究所	11	29	2.0	5.0
7	刘秀财	北京地坛医院传染病研究所	2	2	1.0	1.0
8	徐浩	山西医科大学附属第一医院感染病科	2	6	2.0	2.0
9	孙成福	北京地坛医院传染病研究所	2	5	2.0	2.0