细胞核抗原Sm B'的基因克隆和原核表达

• 作者: 兰小鹏 廖剑 朱忠勇 杨湘越 钟智强
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 核抗原 克隆 分子 融合基因
• 年，卷（期）: 2006,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 166-168
• 页数: 3页
• 分类号: R446.6
• 字数: 2093字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2006.03.003

摘要

目的为建立抗Sm自身抗体检测方法,自行克隆、表达和鉴定细胞核抗原Sm B'.方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆Sm B'全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定.结果PCR产物约为700 bp,与预期657 bp接近,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致.pGEX-5T-Sm B'重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和western blot结果显示融合蛋白分子量为51 000,具有与抗Sm B'抗体的反应性.结论成功克隆表达核抗原Sm B',为建立抗Sm自身抗体检测方法奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	兰小鹏	南京军区福州总医院全军医学检验中心	103	463	11.0	14.0
2	杨湘越	南京军区福州总医院全军医学检验中心	50	247	9.0	13.0
3	朱忠勇	南京军区福州总医院全军医学检验中心	98	953	11.0	29.0
4	钟智强	南京军区福州总医院全军医学检验中心	8	15	3.0	3.0
5	廖剑	南京军区福州总医院全军医学检验中心	12	41	3.0	6.0