HBsAg重组腺病毒载体的构建及在树突状细胞的表达

• 作者: 蔡玲斐 贾红宇 陈智 黄茵
• 来源期刊: 浙江预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎表面抗原 树突状细胞 腺病毒 基因转染
• 年，卷（期）: 2006,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-3,11
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 2825字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-0931.2006.06.001

摘要

目的构建能高效转导HBsAg基因的重组腺病毒Ad-S,证实其能在小鼠树突状细胞内表达,以用于基因治疗的实验研究.方法应用AdEasyTM XL腺病毒载体系统,首先将HBV S基因克隆到p-shttle-CMV形成重组穿梭载体,用PmeⅠ酶切使之线性化,电转化到BJ5183-AD-1细胞中形成重组腺病毒Ad-S质粒,后者以PacⅠ酶切线性化,转染到AD293细胞包装为重组腺病毒Ad-S.Ad-GFP或Ad-S以MOI为100转染经GM-CSF、IL-4和TNF-α等细胞因子诱导培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞,用流式细胞仪分析细胞荧光表达,Western blot、RIA和ELISA法检测HBsAg的表达.结果PCR、序列测定和酶切鉴定证明HBsAg重组腺病毒Ad-S构建正确,扩增到的病毒颗粒滴度为108/ml;流式细胞仪分析细胞荧光表达率为(92.93±2.35)%,荧光强度达236.67±45.72;Western blot、RIA和ELISA法均检测到Ad-S转染的树突状细胞能表达HBsAg.结论HBsAg重组腺病毒Ad-S构建正确并能高效转染树突状细胞和表达HBsAg,为进一步研究腺病毒介导HBsAg基因修饰的DC疫苗的免疫治疗作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈智		162	1080	15.0	27.0
2	蔡玲斐	杭州师范学院医学院	33	230	8.0	14.0
3	黄茵	杭州师范学院医学院	13	89	6.0	9.0
4	贾红宇		18	157	6.0	12.0