携带hVEGF121-EGFP融合基因的腺病毒表达载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

• 作者: 李兵仓 王建忠 陈志强 陈菁
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒载体 血管内皮生长因子 绿色荧光蛋白 基因治疗 NIH3T3细胞
• 年，卷（期）: 2006,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 315-318
• 页数: 4页
• 分类号: R34|R392.11|R394-33|R394.2
• 字数: 2882字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.04.011

摘要

目的构建携带人血管内皮细胞生长因子121 (human vascular endothelial growth factor 121, hVEGF121)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)融合基因的腺病毒表达载体,观测其表达.方法以pUC18-hVEGF121质粒中的hVEGF121 cDNA为模板,用PCR法扩增hVEGF121 cDNA片段并去除其终止密码子,将此片段连接到含有EGFP cDNA的pEGFP-n1质粒中,再将融合基因hVEGF121-EGFP克隆到穿梭质粒pDC315中,与腺病毒质粒共同转染293细胞,构建重组腺病毒,并进行滴度测定.用重组腺病毒感染NIH3T3细胞,在荧光显微镜下观察荧光强度,并用免疫组化法检测VEGF121在NIH3T3中的表达.结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,病毒滴度为1.2×1010～2.7×1011 pfu/ml.荧光显微镜下观察表明,感染重组腺病毒的NIH3T3细胞有明显的绿色荧光表达.免疫组化结果也证明VEGF121能在NIH3T3中的表达.结论构建的hVEGF121-EGFP腺病毒表达载体可在真核细胞表达,有可能用于缺血性疾患的基因治疗,并观察外源基因在体内的表达.