人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 段小军 蒋春华 贺伟峰 高钰琪 黄庆愿 黄缄
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 HIF-1α基因 同源重组
• 年，卷（期）: 2006,（20）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2040-2043
• 页数: 4页
• 分类号: Q782|Q789
• 字数: 3594字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.20.008

摘要

目的 构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况.方法 采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010 pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010 pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力.结论 应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体.