用小双链RNA抑制转化入HUVEC中绿色荧光蛋白基因的表达

• 作者: 余细勇 单志新 杨敏 林曙光 林秋雄 符永恒 谭虹虹 邓春玉 郑猛
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 绿色荧光蛋白 人脐静脉血管内皮细胞 脂质体
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 262-265
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2006.02.012

摘要

目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),研究小干扰RNA(siR-NA)对HUVECs中GFP表达的抑制作用.方法:用lipofectamine2000将编码GFP的质粒pN3-EGFP转入HUVECs中.用G418筛选并维持已转化pN3-EGFP的HUVEC(HUVEC-GFP).利用T7RNA转录试剂盒,制备可抑制GFP基因表达的siRNA(GFPsiRNA)和无关对照的RNA(control siRNA).用oligofectamine将siRNA转入HUVEC-GFP中.继续培养48 h后,检测HUVEC-GFP中GFP蛋白和mRNA表达水平.结果:用G418筛选获得了HUVEC-GFP细胞株,可以观察到GFP的稳定表达.HUVEC-GFP转化siRNA后48 h,GFP的荧光强度明显下降,而对照组的荧光强度无明显下降.半定量RT-PCR检测显示,GFPsiRNA对GFP mRNA表达有较强的抑制作用,抑制率达40%,而control siRNA对GFPmuRNA表达水平无明显的抑制作用.结论:利用体外转录合成的siRNA能有效地抑制HUVECs中GFP的表达.