改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7

• 作者: 刘小立 刘涛 吴平芳 庄志雄 张佳峰 张顺祥 扈庆华 李庆阁 王冰 石晓路 贺连华 郑琳琳
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌O157:H7 改良分子信标 实时PCR
• 年，卷（期）: 2006,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 761-762
• 页数: 2页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2171字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-9727.2006.05.007

摘要

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157:H7的快速方法. 方法根据GenBank公布O157:H7的rfbE保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5'端,建立改良分子信标实时PCR检测O157:H7的反应体系,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测. 结果共检测11种细菌,只有大肠杆菌O157:H7有荧光信号,其余10种全无荧光信号,且与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为64fg,菌液灵敏度为59cfu/ml或2cfu/PCR反应体系.应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157:H7均出现特异的荧光信号,无干扰.对89份食品样品进行检测,5份O157:H7实时PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2h.5份阳性样本,经传统方法培养,有3份检出大肠杆菌O157:H7. 结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于大肠杆菌O157:H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.