人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体的构建及测序

• 作者: 严泉 刘敬 周光前 周新 彭代智 李芳 林恒 王勇 田易 董征学
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: RNA干扰 慢病毒表达载体 CCL20基因
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 1007-1009
• 页数: 3页
• 分类号: Q75|Q781|Q782
• 字数: 2655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2006.10.003

摘要

目的利用RNA干扰技术,以人CCL20基因为靶基因,设计CCL20基因特异性的小干扰RNA(siRNA),构建其短发夹RNA(shRNA)重组慢病毒表达载体,并进行测序鉴定.方法设计并合成人CCL20基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经Spe Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN质粒上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定.结果将合成的两对人CCL20基因特异性DNA寡核苷酸序列退火后,分别克隆到线性化的pHSER-dsRNA-GFP-SIN载体质粒上.在氨苄青霉素培养基条件下,筛选出相应的阳性菌落,经DNA测序鉴定确实为所需序列.结论构建成功了2对人CCL20基因特异性shRNA重组慢病毒表达载体,可进一步用于干扰CCL20基因的mRNA转录,从而为制备CCL20基因表达抑制型的人角朊干细胞奠定基础.