云南阿昌族G6PD基因突变G487A在DF213中的表达

• 作者: 余果宇 冯维杨 吕会茹 崔映波 朱月春 李丹怡 李治纲 李鸿钧 杨银峰 黄尤光
• 来源期刊: 生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 阿昌族 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 基因 表达载体
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 分子生物物理
• 页码范围: 20-28
• 页数: 9页
• 分类号: Q78
• 字数: 4136字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-6737.2007.01.003

摘要

为获得阿昌族G6PDWT和G6PDG487A重组蛋白,研究G6PDG487A的结构和功能改变,从云南省德宏州梁河县杞木寨乡湾中村阿昌族聚集地的G6PD缺陷家系先证者和正常阿昌族个体全血提取RNA,经RT-巢式PCR得cDNA,将cDNA克隆至pMD18-T simple载体中并测序;错配碱基经定点突变修复后,目的基因亚克隆至pThioHis(A)载体,构建了阿昌族G6PD基因野生型和G487A突变型原核表达载体:pThioHis(A)-AChang-G6PDWT和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A.用重组质粒转化E.coli Competent Cells DF213(G6PD defeciency),经IPTG诱导G6PD表达、10%SDS-PAGE电泳检测表达蛋白和紫外340 nm定量测定G6PD活性的分析表明,pThioHis(A)-AChang-G6PDWr和pThioHis(A)-AChang-G6PDG487A在DF213中成功表达,分子量约为59 kDa.IPTG诱导0、3、6、9、和12 h后,G6PD活性逐渐增高,G6PD基因WT表达的酶活性约是G487A的20～25倍.表达载体的构建以及G6PD cDNA在DF213中成功表达,为重组酶G6PDG487A的进一步研究奠定了基础.