大腹园蛛Avg 1的原核表达及生物学活性

• 作者: 任洪林 卢士英 孟宪梅 柳增善 潘风光
• 来源期刊: 延边大学医学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 组织蛋白酶B 克隆,生物 基因表达 蜘蛛
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 15-19
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3213字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1824.2007.01.004

摘要

[目的]研究大腹园蛛组织蛋白酶B相关基因Avg 1(基因登录号:AY 302573)编码蛋白的生物学特性.[方法]设计合成引物(AvgS,AvgX),扩增Avg 1,去除信号肽部分基因Avg,将其与原核表达载体pET-28 a(+),pET-20 b连接,转化到E.coli BL 21(DE 3)中.[结果]鉴定为阳性克隆后,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳显示Avg-28 a-DE 3在近35.7 ku处出现明显的表达带,其大小与预计分子质量(35.2 ku)相当;经薄层扫描分析显示,表达蛋白量占菌体蛋白总量的39.6%,且表达形式主要为包涵体,而Avg-20 b-DE 3表达产物未见表达带,但RT-PCR方法检测到了Avg mRNA的转录;将表达的包涵体蛋白进行变性及复性处理,与诱导的Avg-20 b-DE 3表达菌经超声波碎菌处理上清液一同进行蛋白酶活性测定,呈复性的包涵体蛋白不具有酶活性,而Avg-20 b-DE 3的碎菌上清液显示明显的蛋白酶活性.表达的包涵体蛋白经电洗脱纯化后,常规方法免疫吉绒獭兔,抗血清经ELISA法检测,呈明显阳性反应,经Western blot检测在35.7 ku处出现特异结合带.[结论]Avg 1原核表达蛋白具有良好的免疫原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳增善	吉林大学教育部人兽共患病重点实验室	65	452	11.0	19.0
2	潘风光	吉林大学教育部人兽共患病重点实验室	42	319	8.0	17.0
3	卢士英	吉林大学教育部人兽共患病重点实验室	18	56	5.0	7.0
4	孟宪梅	吉林大学教育部人兽共患病重点实验室	14	34	3.0	5.0
5	任洪林	吉林大学教育部人兽共患病重点实验室	15	52	4.0	7.0