HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

• 作者: 任东明 余枫华 刘朝奇 史继静 杨凡 杨春秀 柳发勇 韩莉 韩钰
• 来源期刊: 实用医学进修杂志
• 关键词: HIV-1 p15(Gag)基因 原核表达 免疫原性 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2007,（4）
• 所属期刊栏目: 学术窗口
• 页码范围: 219-223
• 页数: 5页
• 语种: 中文

摘要

目的:构建HIV-1 p15(Gag)原核表达载体,诱导蛋白表达及制备多克隆抗体.方法:用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的蛋白的免疫原性.纯化目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),细胞免疫组织化学法检测抗体滴度及其特异性.结果:原核表达载体pET28 a(+)-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达,得到相对分子质量约20 KD的p15(Gag)蛋白,经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论:得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.