重组腺病毒Ad-绿色荧光蛋白/干细胞白血病基因的构建及在Cajal间质细胞缺失模型鼠体内的分布和表达

• 作者: 刘宝华 张林 李春穴 童卫东
• 来源期刊: 中华胃肠外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 便秘,慢传输型 腺病毒载体 基因,干细胞白血病 基因疗法 同源重组 Cajal间质细胞
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 119-123
• 页数: 5页
• 分类号: R73
• 字数: 4331字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1671-0274.2007.02.005

摘要

目的 研究绿色荧光蛋白(GFP)标记的人干细胞白血病基因(SCL)重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞(ICC)缺失模型鼠体内的分布和表达,为进一步研究慢传输型便秘(STC)的基因治疗奠定基础.方法 利用Ad-Easy系统、细菌内同源重组法快速构建重组腺病毒Ad-GFP/SCL.经尾静脉注射1.6×109 PFU的重组腺病毒给ICC缺失模型Balb/c小鼠,在不同的时相点检测重组腺病毒在小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内的分布和表达;苏木精-伊红染色法观察重组腺病毒的体内毒性;RT-PCR法分析重组腺病毒介导的SCL mRNA在各脏器内的表达.结果 通过荧光显微镜观察,在不同时期可以观察到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内有不同程度的GFP表达:苏木精-伊红染色法显示各脏器未见明显毒性反应;RT-PCR法分析显示各脏器均有不同程度的SCL mRNA表达.结论 成功构建的重组腺病毒Ad-GFP/SCL可介导SCL基因在ICC缺失模型Balb/c小鼠体内安全、稳定地表达,为进一步在体研究STC的基因治疗奠定了基础.