氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶Ⅱ的表达纯化及初步活性

• 作者: 吕建新 季敬璋 彭颖 查长森 王震 邹立林 陈云波 陈秀枢
• 来源期刊: 细胞生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 氨基糖苷乙酰转移酶 最低抑菌浓度 纯化 氨基糖苷类抗生素
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 81-85
• 页数: 5页
• 分类号: Q5
• 字数: 4434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7666.2007.01.017

摘要

用PCR扩增的氨基糖苷-(3)-乙酰转移酶Ⅱ[aac(3)-Ⅱ]基因构建了能表达较高活性AAC(3)-Ⅱ的重组工程菌,并获取重组AAC(3)-Ⅱ.含pET28a质粒的工程菌转入aac(3)-Ⅱ基因前后对氨基糖苷类抗生素的最低抑菌浓度进行比较,重组菌超声裂解上清液及其纯化的AAC(3)-Ⅱ进行SDS-PAGE和Western印迹电泳鉴定.最低抑菌浓度表明转入aac(3)-Ⅱ基因的工程菌比未转入的工程菌对庆大霉素(gentamicin,GEN)的提高了256倍,对妥布霉素(tobramycin,TOB)及其奈替米星(netilmicin,NTL)提高了16倍,电泳鉴定表明纯化获取的是重组AAC(3)-Ⅱ,其相对分子质量约为32 kDa,纯度大于95%,纯化后的10 μg AAC(3)-Ⅱ,分别在10 s内使80 μg GEN、30 s内使80 μgTOB和NTL乙酰化而失去抑菌作用.研究为氨基糖苷类抗生素伴侣的开发研究初步打下基础.