布鲁菌BP26基因的克隆、表达及纯化

• 作者: 刘锴 庞盼娇 张付贤 张辉 李晓燕 王俊霞 王兴龙 王学理 闫广谋 高健勇
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 布鲁菌 BP26蛋白 基因克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2007,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 887-889
• 页数: 3页
• 分类号: Q786
• 字数: 1879字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2007.12.005

摘要

目的 克隆布鲁氏菌BP26基因,并在大肠杆菌中高效表达及纯化BP26蛋白.方法 提取布鲁氏菌基因组DNA,用PCR扩增出BP26基因,并克隆到pMD18-T载体上,测序正确后,再亚克隆至pET-28a(+)载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPIG诱导表达,经组氨酸结合树脂柱纯化,并对纯化后的表达产物进行Westem blot鉴定.结果 重组质粒pETBP26经Nde I与Sal I酶切后,可见大小分别为5400和700bp的片段,与理论值相符.转化大肠杆菌BL21(DE3)后,37℃诱导4h,经SDS-PAGE分析,高效表达出带有His-tag标签的融合蛋白BP26,纯化后的蛋白纯度达96%,经Western blot分析,目的蛋白具有抗原特异性.结论 已成功克隆了BP26基因,且表达并纯化了布鲁氏菌BP26蛋白.