布鲁菌VirB5基因的克隆和原核表达及其蛋白纯化

• 作者: 房姣阳 李会玲 李俊玫 王爱华 靳亚平
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁菌 VirB5 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 5-9
• 页数: 5页
• 分类号: S851.33|S852.61
• 字数: 2909字
• 语种: 中文

摘要

布鲁菌Ⅳ型分泌系统是其重要的毒力因子之一,研究其组分中VirB 5基因的作用对于阐明布鲁菌的致病机制具有重要意义.应用PCR技术从B.suis S2菌株中扩增VirB 5基因,克隆到pMD19T-sim-ple载体,经Eco RⅠ、XhoⅠ酶切,与表达载体pET32a连接,得到重组质粒pET32a-VirB5,测序鉴定正确后,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导并确定最佳诱导条件,采用Ni柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果表明,克隆了717 bp大小的VirB 5基因,构建了重组质粒pET32a-VirB5,诱导条件筛选表明,在37℃、菌液OD600值约为0.6时,用1.0 mmol/L IPTG诱导6 h,蛋白表达量最高,表达的蛋白分子质量约为45 ku,且主要以包涵体的形式存在,研究结果为布鲁菌致病机制的研究提供了材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李会玲		6	17	2.0	4.0
2	李俊玫	西北农林科技大学动物医学院	2	3	1.0	1.0
3	房姣阳	西北农林科技大学动物医学院	1	0	0.0	0.0