人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

• 作者: 刘力华 方艳秋 李树蕾 段秀梅 许淑芬 谭岩
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人肝细胞癌相关抗原661 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 免疫原性
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 肿瘤免疫学
• 页码范围: 899-902
• 页数: 4页
• 分类号: R392-33
• 字数: 3022字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens 661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白.方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-T easy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定.结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39 kD的目的蛋白.Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合.结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谭岩	吉林大学第一医院中心实验室	135	608	9.0	17.0
2	段秀梅	吉林大学第一医院中心实验室	63	241	7.0	12.0
3	刘力华	吉林大学第一医院中心实验室	51	162	6.0	9.0
4	方艳秋	吉林大学第一医院中心实验室	76	250	7.0	11.0
5	许淑芬	吉林大学第一医院中心实验室	37	200	6.0	13.0
6	李树蕾	吉林大学基础医学院组织胚胎学教研室	45	277	10.0	14.0