人γ-精浆蛋白的亲和纯化及其糖基化分析

• 作者: 张思河 张青 沈建军 苏明权 郝晓柯 韦晓明
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: γ-精浆蛋白 亲和层析 糖基化
• 年，卷（期）: 2007,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 99-102
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 1945字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2007.02.019

摘要

目的:从人精液中提纯γ-精浆蛋白并对其生物学特性进行鉴定.方法:应用饱和硫酸铵法从小鼠腹水中纯化出抗γ-精浆蛋白的单克隆抗体E4B7,将其共价交联到CNBr-Sepharose4B上,制备成免疫亲和层析柱,用该层析柱亲和纯化经饱和硫酸铵粗提的精液标本.纯化产物分别用SDS-PAGE、Western-blot及ELISA进行生物学特性鉴定,最后经PNGase F、Endo-H酶消化后进行糖基化分析.结果:SDS-PAGE电泳表明纯化蛋白的相对分子量约为44kDa,Western-blot及ELISA鉴定显示该蛋白可与抗γ-精浆蛋白的单抗E4B7特异性结合.对纯化蛋白无论是单用Endo-H酶消化,还是同时用Endo-H酶和PNGase F酶共同消化,消化产物电泳后相对分子量均降低到34kDa左右,而单独用PNGase F酶消化后相对分子量没有改变.Western-blot及ELISA鉴定显示糖苷酶处理后的纯化蛋白仍可与单抗E4B7特异性结合.结论:成功纯化出N-糖基化形式的γ-精浆蛋白,这为下一步筛选人源化抗体奠定了纯的抗原基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郝晓柯		322	1751	18.0	23.0
2	张思河	第四军医大学基础部	23	106	6.0	9.0
3	苏明权		226	1052	14.0	20.0
4	张青		35	119	6.0	8.0
5	沈建军		40	228	7.0	13.0
6	韦晓明		13	86	4.0	9.0