mMIP-1α-DT390重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达研究

• 作者: 吕梅励 张卫东 张林 李虹 梁伟波 蒋忠华 贾怡 陈文捷
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 巨噬细胞炎症蛋白-1α 白喉杆菌外毒素 重组免疫毒素 真核表达
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2007.01.001

摘要

目的 构建小鼠MIP-1α(mMIP-1α)基因和白喉杆菌外毒素DT390基因的真核融合表达载体,并对其功能进行初步研究.方法 通过RT-PCR获得mMIP-1α基因,插入含DT390基因的真核质粒SRα,获得真核表达载体SRα-mMIP-1α-DT390.重组载体经PCR、限制性内切酶酶切及DNA序列测定鉴定,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测目的蛋白的表达,并利用转染NIH3T3细胞后的培养上清体外测定mMIP-1α-DT390融合蛋白的选择性细胞毒活性.结果 成功构建真核表达质粒SRα-mMIP-1α-DT390,mMIP-1α-DT390融合蛋白可在NIH3T3细胞株中正确表达,细胞转染上清对小鼠活化T淋巴细胞具有较强的细胞抑制效应.结论 mMIP-1α-DT390融合基因真核表达载体的获得及功能的部分研究为进一步研究其抗炎效果和临床应用奠定基础.