重组人神经生长因子腺相关病毒载体的构建及病毒滴度的测定

• 作者: 刘相萍 吕振华 杨堃 王传富 罗文娟 隋爱华
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 神经生长因子 基因克隆 腺相关病毒 病毒滴度 角膜
• 年，卷（期）: 2007,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 728-731
• 页数: 4页
• 分类号: Q939.4|R772.2
• 字数: 3420字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2007.10.003

摘要

目的 克隆人神经生长因子-β(nerve growth factor-β,NGF-β)基因,重组于腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体,构建表达人NGF-β的重组腺相关病毒,检测滴度,为NGF-β的真核表达及临床应用提供实验基础.方法 从正常人基因组中扩增出人NGF-β全长开放读框,将其克隆于pAAV-MCS载体,双酶切和测序鉴定重组病毒载体.将该质粒与腺相关病毒包装质粒(pAAV-RC)、腺相关病毒辅助质粒(pAAV-Helper)共转染AAV-293细胞,通过包装得到重组腺相关病毒并回收病毒原液.以pAAV-LacZ和pAAV-RC、pHelper共转染AAV-293细胞,重组病毒AAV-LacZ感染AAV-HT1080细胞,经对报告基因LacZ的X-Gal染色,通过蓝染的细胞计算病毒滴度.结果 PCR产物经电泳证明大小正确,重组质粒pAAV-NGF-β经双酶切和测序证实NGF-β基因正确插入载体且序列正确.通过AAV-LacZ感染AAV-HT1080细胞后X-gal染色计数,测定重组腺相关病毒的滴度为10×109 pfu·L-1～.结论 成功构建了表达人NGF-β基因的重组腺相关病毒载体,为进一步研究NGF-β基因治疗角膜病打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王传富	青岛大学医学院附属医院眼科	70	328	11.0	14.0
2	隋爱华	青岛大学医学院附属医院分子生物学研究室	92	345	10.0	12.0
3	杨堃	青岛大学医学院附属医院分子生物学研究室	59	195	8.0	11.0
4	刘相萍	青岛大学医学院附属医院分子生物学研究室	61	180	7.0	8.0
5	吕振华	青岛大学医学院附属医院分子生物学研究室	33	114	7.0	9.0
6	罗文娟	青岛大学医学院附属医院眼科	9	25	3.0	4.0