绿色荧光蛋白表达载体的改造和表达

• 作者: 张宝路 徐曙光 李佳 李海 杨宁 潘求真 田亮 连正兴 韩红兵
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 表达载体 猪 改造
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 13-15
• 页数: 3页
• 分类号: S828.8
• 字数: 2132字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7034.2007.01.004

摘要

为获得增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的真核表达载体pEFP-N1-MSC,并观察其在猪成纤维细胞中的表达情况,用Nhe Ⅰ和Age Ⅰ消除pEGFP-N1质粒上的多克隆位点(MSC),然后补平连接,获得增强型绿色荧光蛋白编码基因的真核表达载体pEGFP-N1-MSC质粒,将pEGFP-N1-MSC质粒转化DH5α感受态细胞,于Kanr+LB平板上筛选阳性克隆.重组子经Nhe Ⅰ和Age Ⅰ双酶切鉴定,将该载体转染猪成纤维细胞,24 h后观察EGFP表达情况,48 h后添加G418进行筛选.结果表明:改造的pEGFP-N1-MSC真核表达载体,成功转染猪成纤维细胞,在倒置荧光显微镜下呈现绿色光,获得可产生绿色荧光的pEGFP-N1-MSC载体,为构建猪双正选择同源重组载体奠定了基础.