分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及在HepG2细胞中的表达

• 作者: 张桂珍 张玉成 杜珍武 王雅丽
• 来源期刊: 中国体视学与图像分析
• 学科: 医学
• 关键词: 核心蛋白聚糖 聚合酶链反应 HepG2
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 180-184
• 页数: 5页
• 分类号: Q513|Q539|R735.7
• 字数: 2601字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-1482.2008.03.007

摘要

目的 构建分泌型核心蛋白聚糖(decorin)真核表达载体,并在肝癌细胞HepG2中表达,为研究核心蛋白聚糖的抗肿瘤作用奠定基础.方法 利用特异性引物,应用PCR技术扩增核心蛋白聚糖全长基因cDNA片段,与pcDNA3.1载体进行连接,并转化到大肠杆菌JM109中扩增以获得重组载体,应用双酶切、PCR以及测序鉴定此重组载体;脂质体介导重组载体转染HepG2,经G418筛选建立稳定转染细胞株,分别采用RT-PCR、免疫组化法和westernblot检测其表达.结果 获得了约1080 bp大小的特异性DNA片段;PCR产物与真核表达载体进行连接,经过双酶切、PCR以及测序鉴定证实分泌型核心蛋白聚糖cDNA片段正确插入真核表达载体pcDNA3.1中.RT-PCR方法 可见转染组mRNA表达明显增多,免疫组化和westernblot方法 可见转染组细胞decorin蛋白表达明显增高.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-decorin,建立了稳定转染decorin的HepG2细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张桂珍	吉林大学中日联谊医院中心实验室	109	466	11.0	16.0
2	张玉成	吉林大学中日联谊医院中心实验室	30	116	6.0	9.0
3	杜珍武	吉林大学中日联谊医院中心实验室	59	140	6.0	8.0
4	王雅丽	吉林大学中日联谊医院中心实验室	19	75	5.0	8.0