TACE基因shRNA真核表达载体的构建及其对HeLa细胞生物学活性的影响

• 作者: 杨业金 杨渝珍 章杰 闫媛
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子转换酶 小发夹结构 RNA HeLa 细胞 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 426-430
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 3762字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2008.04.002

摘要

目的 构建靶向肿瘤坏死因子转换酶(TACE)的小发夹结构 RNA(shRNA)的真核表达载体,观察干扰TA-CE 表达对 HeLa 细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计针对 TACE 基因的 4 个 shRNA 序列,构建真核表达载体 shR-NA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4.通过酶切和测序等方法进行鉴定.转染 HeLa 细胞后,用 Reahime PCR 的方法检测其对 HeLa 细胞 TACE 基因表达的影响;用ELISA检测细胞分泌的 sTNF-α,间接反映干扰 TACE 的效果;用 MTT 法检测细胞增殖活性;用 DNA ladder 和流式细胞术检测细胞凋亡.结果 成功构建和筛选出了针对 TACE 基因的 3 个有效的特异性真核表达载体,且均在不同程度上抑制了 HeLa 细胞 TACE 基因的表达.ELISA 检测结果与 Reahime PCR实验结果相符.同时发现干扰 TACE 基因后,HeLa 细胞的生长受到抑制,凋亡率升高,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05).实验组转染 shRNA1～3 后 72 h 可见特征性的基因组 DNA ladder 条带.结论 所构建的TACE shR-NA 真核表达载体能显著抑制 TACE 的表达.干扰 TACE 基因的表达可有效抑制 HeLa 细胞的增殖并诱导其凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨渝珍	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	36	111	5.0	9.0
2	杨业金	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	21	187	8.0	13.0
3	闫媛	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	4	1	1.0	1.0
4	章杰	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	3	1	1.0	1.0