人GST-PTEN融合蛋白的原核表达和纯化

• 作者: 冯智慧 刘晓华 李长缨 焦淑贤 胡彬
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因 原核表达 融合蛋白 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 296-298
• 页数: 3页
• 分类号: R34
• 字数: 2579字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2008.04.004

摘要

目的 构建人第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homolo-gy deleted on chromosome ten.PTEN)原核表达质粒,使其在原核细胞中高效表达并进行纯化.方法 于将全长片段插入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组子pGEX-4T-1-PTEN,转化BL-21感受态细胞.经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达PTEN融合蛋白的可诱导性表达,通过SDS-PAGE电泳、Western印迹分析证实蛋白表达的特异性.并用谷胱甘肽-S-转移酶(glutathione-Stransferase,GST)亲和层析对融合蛋白进行纯化.结果 流成功构建了原核表达载体pGEX-4T-1-PTEN,并将PTEN融合蛋白的成功表达,通过SDS-PAGE电泳、Western印迹分析,证实了篮门表达的特异件.并对蛋白进行了纯化,获得了GST-PTEN融合蛋白的纯晶.结论 成功表达、纯化了GST-PTEN融合蛋白,为进一步研究PTEN蛋白的功能及其与其它功能性蛋白的相互作用研究奠定了基础.