结核分枝杆菌H37Rv色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析

• 作者: 徐胜凤 沈洪波 王洪海 王虹军 赵静静
• 来源期刊: 微生物与感染
• 学科: 医学
• 关键词: 结核分枝杆菌 色氨酸合成酶 α亚基 同源模建
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 195-199
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4207字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6184.2008.04.001

摘要

目的 克隆表达色氨酸合成酶α亚基编码基因并对其进行功能分析.方法 以结核分枝杆菌(简称结核杆菌)H37Rv基因组为模板,扩增trpA基因,构建pET30a-trpA重组质粒;转化重组质粒到大肠埃希菌DH5α并在BL21(DE3)诱导表达,纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶α亚基(His-rMtTrpA).十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱分析测定相对分子质量(Mr)后,用圆二色光谱(CD)分析和同源模建方法检测二级和三级结构.研究不同浓度His-rMtTrpA对β亚基酶活反应的影响.结果 成功克隆了813 bp的目的 基因trpA,并获得了高纯度的His-rMtTrpA蛋白.重组蛋白Mr为33.151×103(含载体蛋白).25℃时His-rMtTrpA的二级结构包括31.8%α螺旋、31.8%β折叠、8.4%β转角和27.9%无规则卷曲,它的三维模型显示为(β/α)8桶状结构.酶学性质研究表明,在His-rMtTrpA与MtTrpB的摩尔比为2.2时,色氨酸合成酶α亚基可以最大限度促进β亚基酶活反应.结论 成功得到高纯度的重组目的 蛋白His-rMtTrpA,其功能分析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪海	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	97	667	13.0	21.0
2	赵静静	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	徐胜凤	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	王虹军	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	沈洪波	复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室	8	67	4.0	8.0