重组分泌型人CREG/myc-His融合糖蛋白的表达及功能分析

• 作者: GUO Liang HAN Ya-Ling LUAN Bo YAN Cheng-Hui 孙鸣宇 康建 郭鹏
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒E1A蛋白(E1A) 阻遏子 真核表达载体 糖蛋白
• 年，卷（期）: 2008,（8）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 685-688
• 页数: 4页
• 分类号: Q513.2|R34
• 字数: 3433字
• 语种: 中文

摘要

目的:构建人E1A激活基因阻遏子(Human cellular repressor of E1A-stimulated gene,hCREG)基因的真核表达载体并转染人293F细胞株,筛选稳定转染细胞克隆,鉴定重组的分泌型hCREG/myc-His融合蛋白的糖基修饰和生物学功能.方法:用RT-PCR技术扩增终止密码突变的hCREG开放读码框并构建pcDNA4 myc-His/hCREG真核表达载体;Lipofectamine 2 000转染人293F细胞株并筛选稳定表达细胞克隆,去血清法诱导重组蛋白表达;应用Western blot方法鉴定分泌型hCREG/myc-His融合蛋白的表达,糖苷酶法及Western blot行hCREG/myc-His融合蛋白的糖基化分析;用流式细胞周期分析分泌型hCREG/myc-His融合蛋白对体外培养的人胸廓内动脉平滑肌细胞(HITASY)增殖能力的影响.结果:RT-PCR扩增含终止密码突变的hCREG cDNA片段,经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切构建了pcDNA4 myc-His/hCREG真核表达载体,酶切及测序结果证实构建的重组质粒正确;Western blot证实转染pcDNA4 myc-His/hCREG的293F细胞克隆可以稳定表达并分泌hCREG/myc-His融合蛋白;糖苷酶分析证实分泌型hCREG/myc-His融合蛋白是糖基化蛋白;流式细胞周期分析证实与正常培养HITASY细胞比较,添加含有分泌型hCREG/myc-His糖蛋白上清的HITASY细胞出现明显的G1期细胞周期阻滞现象(58.88% vs 62.89%,P＜0.005).结论:构建了pcDNA4 myc-His/hCREG真核表达载体并表达了具有生物学功能的分泌型重组hCREG/myc-His糖蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭鹏	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	2	6	1.0	2.0
2	康建	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	54	326	11.0	16.0
3	孙鸣宇	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	38	108	6.0	10.0
4	HAN Ya-Ling	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	1	6	1.0	1.0
5	GUO Liang	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	1	6	1.0	1.0
6	LUAN Bo	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	1	6	1.0	1.0
7	YAN Cheng-Hui	沈阳军区总医院全军心血管病研究所	1	6	1.0	1.0