北京地区人Boca病毒外壳蛋白VP2的原核表达及抗原性初步分析

• 作者: LI Yan 朱汝南 王芳 董慧瑾 赵林清 邓洁 钱渊
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人Boca病毒 主要外壳蛋白VP2 原核表达 抗原特异性
• 年，卷（期）: 2008,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4487字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5101.2008.01.001

摘要

目的 获得新发现的北京地区人Boca病毒(HBoV)主要外壳蛋白VP2,为对该病毒病原学的深入研究打下基础.方法 从已证明为HBoV阳性的临床标本BJ3722中经PCR扩增得到HBoV VP2蛋白编码区基因片段,将其克隆至pUCm-T载体中,然后再亚克隆至原核表达载体pET-30b(+),经双酶切、PCR、序列测定等方法 挑选、鉴定阳性克隆,得到重组表达质粒pET-30b-VP2,转化大肠杆菌BL21(DE3),在不同的温度下利用IPTG诱导蛋白表达;对得到的蛋白表达产物粗提物经Ni2+亲和层析纯化后,利用抗组氨酸抗体、兔抗HBoV-VP2多肽免疫血清及人血清进行抗原性初步分析.结果 BJ3722 VP2基因正确插入pET-30b中,开放阅读框架正确,表明得到了预期的pET-30b-VP2重组原核表达质粒.比较25℃、30℃、37℃ 3个不同温度下的蛋白表达产物,以25℃ 1 mmol/LIPTG诱导培养过夜后产生的带6×His标记的重组VP2蛋白量最大,主要以包涵体形式存在.VP2蛋白粗提物经Ni2+亲和层析,在pH4.5时获得较理想的纯化结果.Western blot显示所表达的蛋白质能够与抗组氨酸特异性抗体、兔抗HBoV-VP2蛋白多肽免疫血清以及人血清发生反应.结论 本研究成功构建了重组pET-30b-VP2原核表达质粒,改善了表达及纯化条件,得到了较大量的HBoV-VP2蛋白表达,并初步证明表达产物具有抗原特异性,可用于对这一新发现病毒的进一步深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵林清	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0
2	钱渊	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0
3	董慧瑾	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0
4	朱汝南	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0
5	邓洁	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0
6	王芳	北京市感染与免疫中心实验室首都儿科研究所病毒研究室	1	9	1.0	1.0