HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

• 作者: 任东明 余枫华 刘朝奇 史继静 杨凡 杨春秀 柳发勇 韩莉 韩钰
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: HIV-1p15(Gag)基因 原核表达 免疫原性 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 352-355
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2893字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2008.03.027

摘要

目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a(+)-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.