沙蚕消化道细菌D2胞外蛋白酶的分离纯化及其性质

• 作者: 丁守怡 代玉梅 刘明军 宋旭霞 张艳丽 王斌 钱冬萌 闫志勇
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 双齿围沙蛋 消化道 蛋白酶 纯化 性质
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 93-98
• 页数: 6页
• 分类号: Q556|Q936
• 字数: 3880字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2008.02.004

摘要

目的 分离纯化沙蚕消化道菌D2胞外蛋白酶,并对其性质进行分析.方法收集48h发酵液上清,经80%饱和硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose 阴离子交换层析、Superdex G-75凝胶过滤层析逐步纯化D2蛋白酶,分析其酶学性质,并用ESI-MS/MS测定其酶解后的部分氨基酸序列.结果 经纯化,得到电泳纯的D2蛋白酶,纯化倍数为4.9倍,活性回收率为33%,相对分子质量约42 000,纯度大于99%;最适作用温度为60℃,最适pH为9,在pH6～11及0～60℃具有较好的稳定性,水解酪蛋白的Km值为2.44 mg/ml;Cu2+、Ca2+、Mg2+、K+等金属离子对酶活力有明显促进作用,EDTA和PMSF对酶活力有强烈抑制作用;该酶对尿素、SDS、DTT等变性剂有较好的耐受性,其两个内部肽段经质谱测序,序列分别为AHGFLPLTK和APSATGGSALYPLEFVVGK.结论该酶为一高温碱性丝氨酸蛋白酶,具有较高的工业开发价值和较大的应用潜力.