水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂表达载体的构建与表达

• 作者: 何韶衡 王森 魏继福
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 构建 原核表达 水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂
• 年，卷（期）: 2008,（5）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 410-412,415,插二
• 页数: 5页
• 分类号: R976
• 字数: 2706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2008.05.011

摘要

目的:构建水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(leech derived tryptase inhibitor,LDTI)原核表达载体,并在大肠埃希菌[BL21(DE3)]中高效表达重组蛋白.方法:以含有目的核酸序列的质粒为模板,通过PCR技术扩增出LDTI蛋白编码序列,构建含目的片段的T克隆载体以及原核表达载体pEl28a-LDTI重组质粒亚克隆,进行限制性内切酶双酶切鉴定和核酸序列分析,然后将该质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导,以Trieine-SDS-PAGE和蛋白质印迹方法分析和鉴定重组蛋白的表达.结果:成功构建了水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂原核表达载体pET28a-LDTI,并获得相应的融合蛋白;本实验证明,LDTI在大肠埃希菌工程菌中高效表达,在温度为33℃,IPTG浓度为0.7 mmol,诱导时间为1h,所表达的目的蛋白约占菌体总蛋白的15%左右.结论:成功构建了LDTI原核表达载体并使其在原核系统中高效表达,为进一步研究水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂的生化特性和生物学功能奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	何韶衡	汕头大学医学院	126	1181	16.0	27.0
3	魏继福	南京医科大学第一附属医院中心实验室	25	131	7.0	10.0
6	王森	汕头大学医学院	6	15	2.0	3.0