用酵母载体pPIC9k重组构建表达sCR1

• 作者: 刘志 朱传杰 李宗杰 李文利 李新爱 李璇 王广兰
• 来源期刊: 实用医药杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 可溶性补体受体1 毕赤酵母细胞 分泌型酵母载体 表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 212-215
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3
• 字数: 4091字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4008.2008.02.058

摘要

目的 采用酵母细胞分泌型载体pPIC9k表达人可溶性补体受体(sCRI),研究重组人sCRI融合蛋白的体外生物学活性.方法 从人外周血中提取总RNA.应用RT-PCR获得人sCRI全长cDNA,然后将其克隆入毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k中,构建含人sCR1的重组质粒(pPIC9k-sCR1),经测序鉴定正确.电转化入毕赤酵母细胞SMD1168中.将经G418抗性筛选出的重组sCRI酵母细胞株进行PCR鉴定,经甲醇诱导,表达产物经SDS-PAGE分析和Western Blot鉴定,通过Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后进行生物学活性鉴定.结果 获得毕赤酵母细胞分泌型表达载体pPIC9k-sCR1.经G418筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母细胞株.经甲醇诱导含pPIC9k-sCRI的酵母SMD1168细胞表达出重组sCRI融合蛋白.此蛋白在SDS-PAGE上表现为Mr约31 000的蛋白区带.在Westem Blot分析中可被sCR1的CD35单克隆单抗体(mAb)识别.经Ni2+-NTA agarose亲和层析纯化后得到较纯的sCRI融合蛋白及较高的生物学活性.结论 人sCR1融合蛋白在酵母细胞表达系统巾的高水平表达.并且有与人体天然蛋白相同的抗原性及其生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李璇	153医院济南军区检验中心	4	1	1.0	1.0
2	王广兰	153医院济南军区检验中心	7	11	2.0	3.0
3	李新爱	153医院济南军区检验中心	1	0	0.0	0.0
4	李文利	153医院济南军区检验中心	1	0	0.0	0.0
5	朱传杰	153医院济南军区检验中心	2	4	1.0	2.0
6	刘志	153医院济南军区检验中心	2	4	1.0	2.0
7	李宗杰	153医院济南军区检验中心	1	0	0.0	0.0