实时荧光定量PCR对瘤胃纤维分解菌定量方法的构建

• 作者: 刘建新 王佳堃 陈小连
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 瘤胃纤维分解菌 实时荧光定量PcR 标准品质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2008,（11）
• 所属期刊栏目: 动物生产
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: S823.5
• 字数: 3342字
• 语种: 中文

摘要

试验构建了白色瘤胃球菌、黄色瘤胃球菌及产琥珀酸丝状杆菌等3种瘤胃纤维分解菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线,以用于纤维分解菌的定量测定.提取瘤胃微生物总DNA.以各菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCK产物,与pMD18-T Vector连接并转化到大肠杆菌.用氨苄青霉素培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒.根据OD值确定浓度.将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应做出标准曲线.结果表明:所构建的3条标准曲线具有很高的相关性(R2>0.999),并获得了高扩增效率产物(白色瘤胃球菌为101%、黄色瘤胃球菌为98.0%、产琥珀酸丝状杆菌为97.7%),说明成功构建了瘤胃纤维分解菌实时绝对定量PCR的标准品和标准曲线,为定量研究瘤胃纤维分解菌奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘建新	浙江大学动物科学学院	317	3872	30.0	45.0
2	王佳堃	浙江大学动物科学学院	44	344	12.0	17.0
3	陈小连	浙江大学动物科学学院	15	157	8.0	12.0