瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

• 作者: 李长青 栗原光规 金海
• 来源期刊: 畜牧与饲料科学
• 学科: 农学
• 关键词: 瘤胃甲烷菌 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 467-469
• 分类号: S852.6
• 字数: 3253字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5190.2010.06.156

摘要

试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒.根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线.结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李长青	内蒙古农牧业科学院生物技术中心	43	440	12.0	19.0
2	金海	内蒙古农牧业科学院生物技术中心	61	288	10.0	12.0