鸡骨保护素(chOPG)的原核表达、纯化及抗体制备

• 作者: 侯加法 姚静 张风荣 王艳
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 骨保护素 原核表达 纯化 抗体
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 1207-1212
• 页数: 6页
• 分类号: S8
• 字数: 4299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.04.034

摘要

[目的]骨保护素(OPG)是一种新发现能抑制前体破骨细胞分化及成熟破骨细胞活性的蛋白,本文旨在从体外扩增、表达鸡骨保护素(chOPG)蛋白,并制备其多克隆抗体,为深入研究它的生物学功能奠定基础.[方法]以体外培养的鸡胚成骨细胞中提取的总RNA为模板,利用RT-PCR方法,扩增出chOPG基因,测序后克隆至原核表达载体pET-32a(+),成功构建了原核表达质粒pET-32a(+)-OPG,重组质粒转化Rosetta-gami(DE3)pLysS,经IPTG诱导表达.[结果]表达产物经SOS-PAGE电泳,发现目的蛋白大小约为63kD,占菌体总蛋白的11.9%,Western blotting分析显示,表达的chOPG蛋白具有良好的免疫反应性.用镍离子亲和层析的方法可获得纯化的蛋白,以纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA结果显示效价达到1:10240.Western印迹结果表明,该抗体可以和chOPG酵母表达产物特异性结合.[结论]成功地实现了鸡骨保护素在大肠杆菌中的表达,并获得其多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯加法	南京农业大学动物医学院	144	1082	17.0	25.0
2	王艳	南京农业大学动物医学院	27	496	10.0	22.0
3	张风荣	南京农业大学动物医学院	5	8	2.0	2.0
4	姚静	南京农业大学动物医学院	17	109	6.0	10.0