人sApo2L-Fc的分子构建及其在CHO细胞中的表达

• 作者: 刘金毅 吴晓东 牛晓霞 田雅峰
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: sApo2L Fc融合蛋白 CHO细胞 真核表达系统
• 年，卷（期）: 2008,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 21-24
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8135.2008.02.004

摘要

目的:构建人sApo2L-Fc分子,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达有生物学活性的人Apo2L-Fc融合蛋白. 方法:将sApo2L-Fc基因克隆入pcDNA3.1(+)表达载体,重组质粒转化大肠杆菌DH5α.挑取阳性克隆扩大培养,提取质粒进行酶切鉴定;采用脂质体法将重组质粒转入CHO细胞,经G418加压筛选、ELISA检测,挑选表达较高的阳性转化子扩大培养;表达的sApo2L-Fc融合蛋白经Protein A亲和柱纯化,纯化产物用SDS-PAGE,Western blotting检测样品的分子量及免疫原性,用L929细胞进行生物活性测定. 结果:酶切鉴定及测序显示重组子构建与预想一致;ELISA证实了sApo2L-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达;SDS-PAGE检测到纯化产物的分子量与理论分子量相符;在同样的位置,Western blotting显示阳性;L929细胞测定:纯化产物的生物学活性达1.0×105IU/mg. 结论:构建了sApo2L-Fc的表达载体,并成功地在CHO中表达,表达的sApo2L-Fc融合蛋白具有生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	牛晓霞		3	16	3.0	3.0
2	刘金毅		22	98	5.0	9.0
3	吴晓东		41	871	15.0	29.0