人TLR9真核表达载体在HEK293T细胞中的表达

• 作者: 丁国富 吴翀 周红 李军 罗平 蒋为薇
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: Toll样受体9 克隆 真核表达 核转录因子-κB 荧光素酶
• 年，卷（期）: 2008,（13）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1246-1248
• 页数: 3页
• 分类号: R329-33|R392.1|R392.2
• 字数: 2537字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2008.13.009

摘要

目的 构建人Toll样受体9(TLR9)全长序列与绿色荧光蛋白GFP的重组质粒,观察融合蛋白在HEK293T细胞内表达并检测其应答CpG DNA的能力.方法 PCR法扩增TLR9全长,限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切绿色荧光真核表达质粒pcDNA3/GFP和TLR9全长,构建重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP,脂质体转染人胚肾293T细胞(HEK293T),荧光显微镜下观察绿色荧光融合蛋白在细胞内的表达与分布;将重组质粒与NF-κB荧光素酶报告质粒pGL2-luc共转染HEK293T细胞,CpG DNA(10 mg/L)刺激后,化学发光法检测细胞内荧光素酶活性.结果 成功构建pcDNA3-TLR9/GFP质粒,经酶切及测序分析证实载体构建正确;转染细胞后,在荧光显微镜下观察到TLR9/GFP融合蛋白大量表达;重组质粒与pGL2-luc共转染细胞,应用荧光报告系统检测显示,CpG DNA刺激后荧光素酶活性显著高于生理盐水对照组(P<0.01).结论 重组质粒pcDNA3-TLR9/GFP在HEK293T细胞中表达的TLR9/GFP绿色荧光融合蛋白,能够识别CpG DNA并诱导增加胞内NF-κB转录活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周红	第三军医大学药学院药理学教研室	159	733	13.0	17.0
2	罗平	第三军医大学药学院药理学教研室	40	155	8.0	9.0
3	吴翀	第三军医大学药学院药理学教研室	20	88	6.0	8.0
4	李军	第三军医大学药学院药理学教研室	85	449	11.0	15.0
5	丁国富	第三军医大学药学院药理学教研室	17	52	5.0	5.0
6	蒋为薇	第三军医大学药学院药理学教研室	11	38	4.0	6.0